Часто задаваемые вопросы от врачей

1. Сыворотка ВЭГФ (Serum VEGF) и другие средства линии Наноген содержат фактор роста сосудистого эндотелия. Это синтетический или натуральный фактор? По какой технологии его получают?
2. Для чего в стимулирующей рост волос сыворотке Серум ВЭГФ присутствует супероксиддисмутаза?
3. В чем отличие маскирующих нановолокон (Nanofibres) от волокон других производителей?

1. Сыворотка ВЭГФ (Serum VEGF) и другие средства линии Наноген содержат фактор роста сосудистого эндотелия. Это синтетический или натуральный фактор? По какой технологии его получают?

На протяжении всей истории медицины ученые стремились найти вещества, которые можно было бы применять наружно, чтобы вызвать управляемые биологические реакции.   Лишь совсем недавно достижения в области молекулярной биологии позволили полностью описать особенности межклеточных сигналов. Теперь мы знаем, что многие функции клетки, от митоза и дифференцировки до апоптоза регулируются группой сигнальных молекул — цитокинов. Удивителен не факт их существования, о котором медикам было известно давным-давно, а интенсивность и широта диапазона их действий. Эффект цитокинов, или «факторов роста», как их обычно называют, настолько значителен, что, будучи выделенными, они уже начали приносить большую пользу. Терапия цитокинами специфична, а вероятность развития аллергических реакций и непредвиденных побочных явлений — незначительная. Кроме того, поскольку цитокины представляют собой крупные молекулы местного действия, они могут эффективно использоваться на небольших участках.

Одним из важнейших цитокинов, роль которого уже хорошо изучена, является Фактор роста сосудистого эндотелия (ВЭГФ). Одна из его функций – обеспечение регуляции миграции клеток. Хорошо известно, что если пролиферация клеток не сопровождается их организацией и миграцией, ни волос, ни другой орган не сформируются. Волосяной стержень имеет сложную структуру, обусловленную миграцией кератиноцитов, в результате которой образуются дифференцированные слои стержня, а также луковицы и матрицы. С участием ВЭГФ происходит активация генов (протеинкиназы Akt/PKB ) для предотвращения апоптоза. С другой стороны, тот же путь активируется выработкой оксида азота. Этот биосигнал вызывает расширение сосудов и проницаемость мембран; считается, что это способствует миграции клеток и внутриклеточной коммуникации с помощью других цитокинов. Другая важнейшая функция ВЭГФ – развитие сосудов, или Ангиогенез. Без сомнения, основа роста волосяного стержня — достаточное обеспечение кислородом и незаменимыми аминокислотами, которые поступают с кровью. За формирование кровеносных сосудов отвечает именно VEGF. Посредством рецептора VEGFR2 цитокин VEGF стимулирует пролиферацию клеток для расширения сосудов, миграции и организации клеток с образованием новых сосудов. Кроме того, VEGF усиливает выработку оксида азота синтазой eNOS, стимулируя кровеносные сосуды и увеличивая проницаемость клеточных мембран для передвижения питательных веществ. VEGF особенно полезен, поскольку его активация и связанные с ней механизмы действия обусловлены гипоксией, то есть цитокин действует там, где нужно. Еще один важнейший механизм регуляции циклов роста и выпадения волос заключен в механизме апоптоза. В качестве основной причины выпадения волос в течение долгого времени рассматривается дигидротестостерон. Это гормон, проникающий в фолликул, ведет к   преждевременному апоптозу.   Антиапоптозные свойства VEGF проявляются подавлением генов Casp9 и Bad — основных факторов апоптоза клеток.

В сотрудничестве с компанией «Наноген» был создан уникальный безопасный комплекс sh-VEGF растительного происхождения. Все лечебные средства Nanogen содержат комплекс sh-VEGF и циклопироксоламина — Nanogen sh-VEGF™. Циклопироксоламин также способствует действию VEGF, активируя его экспрессию в гипоксических клетках, где он нужен больше всего. Кроме того, циклопироколамин поддерживает уровень ионов Ca2+ в клетке, обеспечивая передачу сигнала от рецептора VEGFR2. Для получения ВЭГФ соответствующий человеческий ген иммобилизуют и секвенируют; последовательность нуклеотидов синтезируют заново, воспроизводят с помощью ПЦР. Таким образом, полученные и воспроизведенные в ПЦР гены очищают и трансфицируют в семена ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare). Растения выращивают методом гидропоники, обеспечивая оптимальные условия для выработки VEGF и не допуская попадания модифицированных генов в окружающую среду. Теперь растение содержит VEGF, гомологичный исходному человеческому и обладающий выраженной активностью. Полученный ячмень собирают, ВЭГФ очищают. В отличие от бактерий и дрожжевых грибов, ячмень обыкновенный не вырабатывает цитотоксины и не вызывает иммунный ответ. Благодаря этому, не развиваются побочные явления и реакции, что обеспечивает эффективность и безопасность для пациента.

2. Для чего в стимулирующей рост волос сыворотке Серум ВЭГФ присутствует супероксиддисмутаза?

Известно, что в клетках волосяных фолликулов при развитии выпадения волос, андрогенетической алопеции и себорейного дерматита накапливается токсическое вещество – пероксинитрит. Реакция образования пероксинитрита протекает следующим образом:

O₂• + NO → NO₃

Таким образом, образуется крайне нестабильный токсичный изомер ONOO• (пероксинитрит) *.

Удаление свободного радикала из соединения O₂• ­ (супероксид радикал) препятствует протеканию данной реакции. Супероксиддисмутаза (СОД) (марганцевая соль) предотвращает образование пероксинитрита ONOO* за счет связывания пероксидрадикала:

_. Mn³⁺(SOD) + O₂•→ Mn²⁺(SOD) + O₂

При этом вся окись азота, необходимая для   расширения сосудов, процессов репарации и стимуляции факторов роста накапливается в необходимом количестве в клетках. Важно, что при этом окись азота не конвертируется в токсичную молекулу пероксинитрита.

В препаратах Наногейн мы используем MnSOD, поскольку именно эта форма энзима была нами исследована и показала наилучшие результаты (другие формы энзима содержат 2+ ионы Zn или Cu).

* ONOO-(Пероксинитрит)

Сильный окислитель пероксинитрит (ONOO-) образуется при взаимодействии NO с O2: NO + O2 = ONOO-, константа скорости этой реакции превышает 10⁹ моль -1 с-1. Пероксинитрит способен окислять NH- и SH-группы белков, что приводит, в частности, к инактивации игибитора протеиназ, тканевого ингибитора металлопротеиназы-1 , Mn-СОД и Fe-СОД . В клетках ONOO- индуцирует процессы перекисного окисления липидов в мембранах [ Radi ea 1991 ] и вызывает разрывы в ДНК [ Salgo ea 1995 ].

Существенный вклад в цитотоксическое действие пероксинитрита вносит образующийся из него ОН-радикал: ONOO- + Н+ = ONOOH + НО* + NO2 .

Так как данная реакция не требует участия металлов переменной валентности, содержание которых в клетках в свободном виде мало, то она может быть одной из основных, приводящих к образованию гидроксильных радикалов . Пероксинитрит также вызывает образование в клетках О2, что проявляется в усилении люцигенинзависимой хемилюминесценции [ Lin ea 1997 ].

Пероксинитрит окисляет железосерные активные центры, тиолы и нитрозилирует белки по остаткам тирозина. В нейтральной среде пероксинитрит достаточно нестабилен и после протонирования (рК = 6.8) быстро разлагается (период полураспада менее 1сек) с образованием гидроксильного радикала короткоживущего и исключительно реакционноспособного интермедиата [ Beckman ea 1994 ].

Radi ea 1991

Radi R.. Beckman J.S.. Bush KM., Freeman В A. // Arch. Biochem. and Biophys. 1991. V. 288. P. 481.

Salgo, ea 1995

Salgo, M.G., Stone, K., Squadrito, G.L., Battista, J.R., and Pryor, W.A. (1995) Biochem. Biophys. Res. Commun., 210, 1025-1030.

Lin ea 1997

Lin K.T., Xue J.Y., Sun F.F., Wong P.Y.K. // Biocheffl. and Biophys. Res. Communs. 1997. V. 230. P. 115.

Beckman ea 1994

Beckman J.S. II Ann. N.Y. Acad. Sci. 1994. V. 738. P. 69-75.

СОД, применяемая в препарате Наногейн, тестировалась на мышиной модели с применением того же протокола, который использовался компанией Upjohn при тестировании Миноксидила. У шести мышей C3H в поясничной области были срезаны волосы на небольших участках диаметром 5 см. Дважды в день на эти участки наносили 0.1 мл 0.5% - 1% СОД до появления роста волос. Наблюдение за участками роста волос производилось с помощью специальной аппаратуры для анализа изображений на 14, 21 и 28 дни от начала исследования. При использовании 1% СОД рост волос наблюдался   у всех испытуемых через 14 дней от начала исследования, также было отмечено и увеличение скорости роста волос на всех участках. При использовании 0.5% концентрации рост волос также наблюдался у всех испытуемых, а увеличение скорости роста волос было на 30% больше, чем аналогичный показатель, полученный при тестировании препарата Миноксидил (2% Rogaine,Upjohn).   Следует также отметить, что при исследовании 2% Миноксидила рост волос у мышей наблюдался у 5 из 6 испытуемых через 28 дней.  По данным наших исследований, результаты, полученные при использовании препарата Наногейн совместно со Скальпроллером Наноген, сопоставимы с результаты применения 5% Миноксидила. Кроме того, средства Наноген, в отличие от   Миноксидила, не содержит спирт, имеет водную основу и, следовательно, может использоваться в течение длительного времени. Известно, что важным условием при длительном лечении пациента является отсутствие побочных эффектов при применении назначаемых препаратов. Алкоголь – содержащие препараты могут вызывать значительную сухость кожи и даже приводить к дерматиту. Наногейн, не содержащий этилового спирта или пропиленгликоля, лишен этих побочных эффектов и комфортен в использовании при длительном применении.

3. В чем отличие маскирующих нановолокон (Nanofibres) от волокон других производителей?

Микроволокна становятся самым распространенным способом маскировки редеющих волос. Их можно использовать ежедневно, они легко смываются, не требуют лишних усилий. Это простая и эффективная альтернатива дорогостоящим процедурам пересадки волос. Кроме того, существует целый арсенал всевозможных аэрозолей и кремов, маскирующих кожу головы. Несмотря на то, что среди них есть и действенные средства, ни одно из них не даст такого эффекта густых волос, как микроволокна. На самом деле, некоторые средства с микроволокнами дают настолько потрясающий и естественный результат, что некоторые люди, не страдающие выпадением волос, начинают присматриваться к этой продукции, наряду с бальзамами-ополаскивателями для увеличения объема, наращиванием волос и средствами для моделирования прически.

Микроволокна для волос представляются идеальным средством и поэтому набирают популярность. Подобрав нужный цвет, их просто наносят на область редеющих волос, они «прилипают» к волосам, и каждый волос выглядит толще, а вся прическа пышнее. Волокна можно наносить ежедневно, они легко смываются. Кроме того, по сравнению с большинством других средств, они обходятся очень недорого.

Оптимальный материал для микроволокон — кератин. Поскольку кератин входит в состав волос и кожи, он не вызывает аллергических реакций, не оказывает раздражающего действия даже при длительном применении. Проводили опыты и с другими материалами, например хлопком и вискозой. Они, конечно, дешевле, но могут вызвать аллергию, раздражение и через несколько дней непрерывного ношения начинают причинять неудобства.

Ключевую в роль в оценке качества волокон играет электростатический заряд. Микроволокна «прилипают» к собственным волосам за счет сильного электростатического заряда. Существует множество способов регулирования заряда микроволокон, в основном они заключаются в нанесении на волокно оболочки или создании специального контейнера, который обеспечивает повышение заряда волокон при встряхивании. . Если волокна лягут параллельно волосу увеличение густоты будет умеренным. А вот если они расположатся перпендикулярно стержню волоса, «елочкой», то обеспечат пышную прическу, поскольку каждый волос будет покрыт мелкими волокнами. Все производители утверждают, что их волокна располагаются перпендикулярно, поскольку именно этим обусловлен потрясающий эффект густоты, однако это правда лишь отчасти. Небольшая часть нанесенных на волосы волокон всегда ляжет перпендикулярно, но большая часть будет располагаться параллельно волосу, притянутая к стержню электростатическим зарядом.

Рис. 1 и 2. Отчет о независимом исследовании. Предметное стекло, на котором видно, что при перпендикулярном «прилипании» к человеческому волосу статистически значимо большего числа волокон обеспечивается более выраженный эффект густоты. На рис. 1 (верхнем) представлен ведущий бренд; на рис. 2 (нижнем) — Нановолокна.

Одно из возможных объяснений перпендикулярного «прилипания» при высоком положительном заряде — это хорошая удельная проводимость волокон Nanogen. Это свойство имеет определенную связь и с наличием металлической заземляющей пластинки, действие которой тоже основано на удельной проводимости волокон. Соответственно, было решено проверить волокна на удельную проводимость.

Рис. 9. Таблица сравнения полярности, плотности заряда и удельной проводимости микроволокон. Меньшее значение определяет вещество с наибольшей проводимостью.

Для следующего испытания взяли две самые популярные торговые марки. Из каждого контейнера на гладкую латунную пластину высыпали примерно по 1 г волокна, пластину затем заземлили на 20 с, чтобы удалить ее остаточный заряд. Затем пластину установили в вертикальное положение и в течение 5 секунд 10 раз стукнули двумя пальцами, чтобы незаряженные волокна упали под действием притяжения и инерции.

Слева Наноген, справа – один из широко известных брендов.

Рис. 10. Кадры видеосъемки для сравнения двух торговых марок кератиновых микроволокон по их «прилипанию» к незаряженной поверхности.

Волокна Nanogen пристали к латунной пластине гораздо сильнее, что указывает на наличие неэлектростатических свойств, также способствующих «прилипанию» волокон к волосам: это могут быть физические свойства или покрытие волокон. Следует отметить, что оба производителя советуют после нанесения волокон на волосы использовать фиксирующий полимер, однако в данном исследовании фиксирующий спрей не проверялся.

Т.о. технологии, использованные при создании Нановолокон и заявленные на получение патентов, не имеют себе равных; благодаря им наша продукция занимает на рынке лидирующие позиции.